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      2. 稳定细胞株构建

        赛库生物采用“第三代”慢病毒载体(慢病毒技术简介),其基因组的3’LTR的增强子功能发生了缺失,从而形成了自灭活Self-inactivationSIN),即该病毒基因组整合到细胞基因组后,不会产生新的子代病毒,也降低了对周围基因的意外激活,因此具有较好的安全性。

        “第三代”慢病毒载体系统由表达载体pLenti-gene、包装辅助载体pGag/PolpRev、包膜载体pVSV-G四质粒组成。可以根据实验目的采用不同的表达载体pLenti-gene,如基因表达研究采用pLV-GeneRNA 干扰采用pLV-U6等进行研究。pGag/Pol载体中含有HIV 病毒的gag 基因,编码病毒主要的结构蛋白;pol 基因,编码病毒特异性的酶;pRev 载体编码rev 基因,是调节gag pol 基因表达的调节因子。pVSV-G载体中含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G 基因,提供病毒包装所需要的包膜蛋白。



        服务流程:

        1. 含目的基因的载体质粒pLV-gene的构建和纯化提取;

        2. pLV-gene、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞包装病毒;

        3. 培养48~72h,收集含病毒的培养基上清;

        4. 慢病毒的纯化和浓缩(超离和/或超滤);

        5. 分装、- 80℃保存;

        6. 滴度测定、最佳MOI测定;

        7. 感染目的细胞,药物筛选及目的基因检测。


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